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【JBO官网机械】自动生化分析仪参数设置技巧

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  • 添加日期:2021年02月01日
  • 1 基本原理及主要参数
    了解生化分析仪基本参数的原理,有利于仪器、试剂的正确使用,有助于正确分析和处理测定数据。生化分析仪根据自动化程度分半自动和全自动,从目前试剂盒供应情况来看,主要的测定方法为:终点法(包括一点终点法和两点终点法)、速率法(连续检测法)、速率两点法(两点法),后两种统称动力学法。
    2 主要参数设置的技巧
    2.1 方法类型可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法,全自动生化仪单试剂选择一点终点法,而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法,尿素氮、肌酐测定等用两点法。

    2.2 测定波长测定波长选择有三个主要条件:(1)待测物质在该波长下的光吸收最大。(2)其吸收峰宜较宽而钝,(3)常见干扰物在该波长下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。有些仪器波长选择受滤光片数量限制,应该就近选择为原则。
    2.3 测定温度一般全自动生化仪都是37℃ ,而半自动生化仪有室温、25~C、30cc、37~C等,终点法由于反应在机外进行,选择室温可以减少仪器温度调整时间,提高工作效率,而速率法和两点法都选择37℃比较合适。

    2.4 样本体积分数样品体积分数即样品体积与反应液总体积的比值(sv/TV)。酶活力测定中,样品在总体积中的比例应在10%以下。一般来说,待测物质在样品中含量低的、生理波动范围大的,样品用量较大。如Trinder反应测定血清葡萄糖、胆固醇等,样品试剂比例多为1:100,测定血尿酸或高密度脂蛋白胆固醇,常增加为1:50;AIJT和AST的样品试剂比例多为1:10至1:20。方法灵敏、吸光度高的实验方法,样品试剂比例小,如白蛋白BCG法,样品试剂比例常为1:200。肌酐Jaffe氏法监测时间短、吸光度值较低,样品试剂比例多为l:10。一般应以试剂说明为准,不宜轻易改动。可根据最终反应液的量来计算样本量和试剂量。

    2.5 吸液量主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数,原则是吸人量不得大于或等于反应液总体积,否则会导致吸空形成比色池气泡,最好留100~200ul的余地。

    2.6 延迟时间延迟时间(Delay Time)指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。延迟时间的选择取决于被测物质的浓度(酶的活性)大小、反应速度的快慢、酶促反应的级数、样品中干扰物消除所需的时间等。比如:CHE活性高仅需20— 30秒,LDH一级反应需30~40秒,AIJT需40~6O秒,AST需60~75秒,CK需90~120秒。半自动生化仪上酶活性连续监测法的延迟时间设定,由于只能单份样品逐一测定,若延迟时问全部设置在仪器内,每个延迟时间加监测时间至少1分钟以上,守候时间较长。工作量大时,可以根据仪器控温、加样及读数和试剂特点,以及室温情况,将延迟时问挪一部分到机外,套式操作,但要确保机内延迟时间不要进入线性反应期。兼顾延迟时间和监测时间反应时间是有限制的。在速率法和两点法中,延长延迟时间必然缩短线性监测期,减少测定的线性范围,也易发生底物耗尽。

    2.7 监测时间 酶促反应延迟期后,在过量底物的存在下,反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段,即酶促反应以恒定的速率进行,不受底物浓度的影响,这段时间称为线性反应期或零级反应期,自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90—120s或至少4点(3个AA),少于3个△A不能称为连续监测法,因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽,可测范围变窄。

    2.8 标准液浓度终点法和两点法必须设置标准,选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液,但是部分项目标准液定标偏差太大,我们使用的是干粉复合罗氏校准液,复溶后分装冷冻保存,只要复溶的水质保证,避免反复冻融,校准的结果还是很满意的。注意校准液靶值获得的方法学,方法不同耙值是有差异的,比较典型的是ALP测定有IFCC和DGKC法,差异比较大,不可简单套用。2.9 K值速率法测定无需带标准或做标准曲线,首先确定样本量和工作试剂量,再根据被测物质的摩尔消光系数,就
    可按速率法计算公式计算出因素K值了。K=TV×10。/(8×SV XL),TV为反应液总体积,sV为样本体积,L为比色杯光径(em),£为毫摩尔消光系数,如NADH/NADPH34Onm为6.22,对硝基苯胺405nm为9.9,5一氨基一2一硝基苯甲酸405rim为9.5,对硝基酚405nm为10.5,5一硫代一2一硝基苯甲酸405nm为13.3。

    2.10 试剂吸光度上下限有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限,主要是用来监测试剂的质量的,但是试剂吸光度上限和下限不是试剂质量的唯一指针。因此,一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规定限值内,但质控物测定结果连续偏低,病人结果因每天标本少而难以判断,最后发现是试剂质量下降。